人細胞ELISA試劑盒的檢測原理主要基于酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)。ELISA是一種廣泛應用于生物醫學(xué)研究和臨床診斷的免疫學(xué)檢測方法,用于定量或定性分析液體樣本中的抗原、抗體或蛋白質(zhì)。
1、包被:首先將針對目標抗原的特異性捕獲抗體固定在微孔板的各個(gè)孔內壁上,形成一層抗體膜。
2、封閉:為了避免非特異性結合,需要用封閉液填充未被捕獲抗體占據的位點(diǎn)。
3、加樣:將含有待測抗原的樣本加入到包被有捕獲抗體的孔中,抗原會(huì )與捕獲抗體特異性結合。
4、洗滌:去除未結合的物質(zhì),通常使用洗滌緩沖液多次清洗。
5、加入檢測抗體:加入針對同一抗原的另一表位的酶標記檢測抗體,該抗體與抗原結合形成“夾心”復合物。
6、再次洗滌:去除未結合的檢測抗體。
7、顯色:加入酶的底物,酶標記的檢測抗體會(huì )催化底物發(fā)生化學(xué)反應,生成可見(jiàn)的顏色產(chǎn)物。
8、終止反應:根據實(shí)驗設計,可能需要加入終止液來(lái)停止顏色的發(fā)展。
9、讀數:使用酶標儀測量每個(gè)孔的光密度(OD值),該值與樣本中抗原的濃度成正比。
通過(guò)與標準曲線(xiàn)比較,可以計算出樣本中抗原的濃度。ELISA試劑盒通常會(huì )提供一系列已知濃度的標準品,以建立標準曲線(xiàn)。
人細胞ELISA試劑盒的優(yōu)點(diǎn)包括靈敏度高、特異性強、操作相對簡(jiǎn)單、可同時(shí)處理大量樣本等。然而,ELISA結果的準確性和重復性受到多種因素的影響,包括抗體的質(zhì)量、樣本的處理和儲存條件、實(shí)驗操作的標準化等。因此,在進(jìn)行ELISA實(shí)驗時(shí),需要嚴格按照說(shuō)明書(shū)的要求操作,并采取適當的質(zhì)量控制措施。